Processus de purification en aval du vaccin contre la diarrhée porcine
La diarrhée est l’une des trois principales maladies qui ont causé d’importantes pertes économiques à l’industrie porcine en Chine. De nombreux facteurs provoquent la diarrhée chez les porcs, les facteurs viraux étant les plus graves. Les porcs de tous âges peuvent être infectés, en particulier les porcelets de lait, et le taux de mortalité après infection peut atteindre plus de 50 %. Le virus de la diarrhée épidémique porcine (PEDV) et le virus de la gastro-entérite transmissible porcine (TGEV) sont répandus dans le monde et les deux virus peuvent être infectés seuls ou en combinaison. Actuellement, il n’existe aucun médicament spécifique pour traiter le PEDV et le TGEV, et la prévention et le contrôle de la diarrhée porcine reposent principalement sur des vaccins commerciaux.
Les vaccins traditionnels contre la diarrhée épidémique porcine comprennent principalement le vaccin inactivé à virus entier et le vaccin vivant atténué. Cliniquement, le vaccin inactivé ou le vaccin atténué en tandem contre le DEP et le VGET, ainsi que le vaccin triple inactivé ou le vaccin atténué contre le DEP, le VGET et le rotavirus porcin (RV), sont principalement utilisés, principalement le vaccin tandem contre le DEP et le VGET.
Il existe actuellement de nombreux vaccins contre la diarrhée épidémique porcine en Chine.
Le processus de production des vaccins inactivés et atténués est similaire, comprenant principalement cinq étapes de culture d'agents pathogènes, d'inactivation ou d'atténuation d'agents pathogènes, d'extraction et de purification d'agents pathogènes, de préparation et d'emballage du vaccin et de contrôle de la qualité des vaccins. Cet article présente principalement la procédure de purification des agents pathogènes.
Clarification
Le but de la clarification est d’assurer l’élimination des débris cellulaires et autres gros agrégats de particules. Dans la production de cultures cellulaires d'une variété de venins, en plus de contenir un grand nombre de particules virales, il existe de nombreux débris de tissus cellulaires, produits métaboliques et autres impuretés, ce qui rend le venin à l'état trouble ou semi- trouble, le direct l'utilisation de cette opération de concentration du venin bloquera bientôt la membrane d'ultrafiltration et ne pourra pas compléter la concentration du venin, ce qui entraînera des déchets de membrane d'ultrafiltration. Par conséquent, avant que le venin ne soit concentré, il doit d’abord être clarifié, ce qui se fait généralement par centrifugation à basse vitesse et filtration sur membrane. Il convient de noter que lors de l'utilisation de la technologie de séparation par membrane, étant donné que le matériau de la membrane est souvent doté d'électronégativité ou de groupes hydrophobes, il est nécessaire de rechercher si le matériau de la membrane est adsorbé par les particules virales.
Une étape de clarification efficace nécessite une combinaison d’une capacité élevée d’élimination des particules solides et d’un rendement en produit élevé, d’une amplification facile et d’une protection des unités opérationnelles ultérieures en aval. Actuellement, un filtre profond est utilisé pour les opérations de clarification.
Cependant, lorsque l’échelle de culture est trop grande, un grand nombre de membranes filtrantes profondes sera nécessaire, ce qui entraînera une augmentation substantielle du coût des consommables. Dans le même temps, la haute densité de culture cellulaire réduira la charge de la membrane filtrante profonde, ce qui entraînera une augmentation des coûts et une dilution excessive du produit.
La méthode de microfiltration utilise principalement un dispositif de filtration à flux tangentiel, et les composants de la membrane sont des cassettes à membrane plate et des fibres creuses. La filtration à flux tangentiel (TFF) est pilotée par la différence de pression transmembranaire. Les substances et impuretés plus petites que la taille des pores de la membrane traversent la membrane, tandis que les impuretés telles que les cellules contenant des particules plus grosses sont piégées. La taille des pores de la membrane utilisée pour la microfiltration est de {{0}},45/0,22 μm. La microfiltration à flux tangentiel à fibres creuses peut traiter directement les liquides à haute teneur en solides, tels que les milieux de culture cellulaire à haute densité, peut éliminer les étapes de centrifugation et de pré-filtration avec moins d'étapes et une opération simple, la membrane peut être utilisée à plusieurs reprises grâce au nettoyage, réduisant ainsi l'investissement et le fonctionnement de l'équipement. coûts, en ligne avec les exigences de la production automatisée modulaire.
Concentration et purification
Après clarification préliminaire, le milieu de culture du virus contient encore un grand nombre d'impuretés, notamment des particules défectueuses, une enveloppe virale, une cytotoxine, un milieu, du sérum et des fragments cellulaires, etc. Si ces impuretés sont injectées à des animaux, elles n'affecteront pas seulement l'efficacité de le vaccin, mais provoquent également une forte réponse immunitaire de l'hôte, voire conduisent à la mort des animaux vaccinés. Par conséquent, la concentration et la purification sont nécessaires pour éliminer les impuretés telles que les hétéroprotéines et les fragments cellulaires, renforcer et induire des réponses immunitaires efficaces, réduire la quantité de vaccin utilisée et réduire les effets indésirables.
Le principe de la purification du virus : maintenir l'activité biologique et le pouvoir infectieux du virus comme prémisse, éliminer les impuretés du virus et extraire la haute pureté du virus.
À l’heure actuelle, les principales méthodes de concentration et de purification utilisées dans la production à grande échelle sont l’ultrafiltration.
La méthode d'ultrafiltration utilise principalement un dispositif d'ultrafiltration à flux tangentiel, un système de filtration à fibres creuses et d'autres équipements de filtration. Dans des circonstances normales, l'application de la méthode d'ultrafiltration peut permettre au virus de se concentrer plus de 100 fois, le taux d'élimination des hétéroprotéines jusqu'à 99 %. Parmi eux, la technologie de filtration sur membrane à fibres creuses présente les avantages d'une force de cisaillement douce et faible, d'un branchement facile, d'un fonctionnement flexible, d'une longue durée de vie et d'un faible coût, ainsi que d'une amplification facile. Il est donc recommandé de choisir des fibres creuses pour la concentration et la purification des virus.
Lorsque la méthode d'ultrafiltration est utilisée pour la concentration et la purification, il est très important de sélectionner la taille appropriée des pores de la membrane, qui détermine directement l'efficacité et la qualité de la concentration. D'une part, il est nécessaire de sélectionner l'ouverture de la membrane pour piéger efficacement les molécules cibles afin de garantir le rendement, et d'autre part, l'effet d'élimination et la vitesse de traitement des hétéroprotéines doivent être pleinement pris en compte. Par conséquent, le meilleur principe est de sélectionner la membrane ayant la plus grande taille de pores pouvant piéger la molécule cible, et d'essayer de sélectionner la membrane filtrante avec une distribution uniforme de la taille des pores.
Le virus de la diarrhée épidémique porcine (PEDV) et le virus de la gastro-entérite transmissible (TGEV) sont tous deux des coronavirus, qui sont des sphères polymorphes, avec des pointes en forme de pointes à l'envers, dont le diamètre varie de 60 à 190 nm. La maladie à rotavirus est une maladie zoonotique dans laquelle le rotavirus (RV) a l'apparence d'une roue et mesure environ 70 nm de diamètre. Ces trois virus peuvent généralement être interceptés à l’aide de membranes d’ultrafiltration à ouverture 100-750kd.
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