FAQ sur les dispositifs de filtrage centrifuge
Q1. Il est nécessaire de séparer des protéines de poids moléculaires différents, alors de combien de différence les poids moléculaires des protéines devraient-ils avoir besoin ?
R : La taille des deux protéines doit différer de 10 fois ou plus.
Q2. Peut centrifugerAlles dispositifs de filtration doivent-ils être stérilisés et résistants au lavage alcalin ?
R : Il peut être stérilisé avec une solution aqueuse d'éthanol à 75 %, et la membrane peut résister à un lavage alcalin à l'hydroxyde de sodium 0.1-0.5N.
Q3. Que faire si la protéine a précipité pendant la concentration ?
A: Si la protéine est concentrée trop rapidement ou trop concentrée, cela peut provoquer une précipitation des protéines et la concentration finale de la protéine après concentration ne doit pas être trop élevée. Protéines sensibles au taux de concentration et ayant tendance à précipiter, méthode d'amélioration suggérée :
Réduire la vitesse centrifuge
Utiliser une membrane d'ultrafiltration avec un seuil de poids moléculaire plus élevé
Souffler et aspirer le tube concentré puis centrifuger
Q4. Quelle est la raison possible pour laquelle ledispositifs de filtrage centrifugene peut pas être centrifugé?
R : Vous pouvez utiliser une solution aqueuse d'éthanol à environ 20 % pour la centrifugation initiale si le tube d'ultrafiltration ne peut pas être centrifugé, car la membrane d'ultrafiltration est complètement sèche, la surface de la membrane est faiblement hydrophobe et le flux peut être restauré après infiltration avec un faible solvant de tension superficielle.
Q5. Méthodes d'utilisation et stockage corrects des dispositifs de filtration centrifuge
R : Les dispositifs de filtre centrifuge doivent être centrifugés avec de l'eau purifiée avant utilisation pour vérifier son intégrité. Après chaque utilisation, il doit être stocké à l'état humide pour éviter que la membrane ne se dessèche.
Q6. Comment les dispositifs de filtration centrifuge éliminent-ils l'endotoxine ?
R : Les dispositifs de filtration centrifuge que nous avons fournis n'ont pas été traités avec des endotoxines, et comme les endotoxines existent largement dans la nature, les échantillons qui nécessitent des endotoxines peuvent être pré-nettoyés avec de l'hydroxyde de sodium 0.5N avant l'expérience, puis lavés avec Eau osmosée pour éliminer la majeure partie de l'endotoxine.
Q7. Lorsque la protéine concentrée est utilisée pour une analyse en aval, on constate qu'il y a interférence, quelle en est la raison ?
R : Les dispositifs de filtration centrifuge peuvent être prélavés avec une solution tampon ou de l'eau purifiée. Si l'interférence persiste, laver avec de l'hydroxyde de sodium 0.1N, puis laver avec de l'eau purifiée.
Q8. IOn constate qu'il n'y a pas de protéine cible dans le concentré après concentration. Quelles sont les raisons possibles ?
R : 1) La concentration initiale de la protéine ne doit pas être trop faible, si la concentration est trop faible, la membrane peut ne pas être en mesure de retenir.
2)Sélectionnez la taille de pores de la membrane appropriée. La concentration centrifuge du tube filtrant appartient à la filtration sans issue et la taille des pores de la membrane est généralement inférieure à 2 fois ou supérieure à la protéine cible.
3) Choisissez la bonne vitesse centrifuge
4) Si la protéine cible précipite
Q9. Traitement de passivation des dispositifs de filtration centrifuge
A: le prétraitement de passivation de la surface des dispositifs de filtre centrifuge peut réduire la perte d'adsorption de protéines sur la surface de la membrane, dans la plupart des cas, le prétraitement de la colonne avant de concentrer la solution de protéines diluée peut améliorer la récupération, car la solution peut remplir le exposé sites d'adsorption de protéines vides sur la membrane et la surface, la méthode de passivation consiste à pré-tremper la colonne avec un volume élevé de solution de passivation pendant plus d'une heure, à rincer soigneusement la colonne avec de l'eau distillée, puis à centrifuger la colonne une fois avec de l'eau distillée pour éliminer complètement la solution de passivation qui peut rester sur la membrane, veillez à ne pas laisser sécher la membrane après passivation, si vous souhaitez la conserver pour une utilisation future, vous devez ajouter de l'eau distillée stérile pour maintenir la membrane humide., veuillez contacter nos ingénieurs pour des solutions de passivation courantes.
Q10. La membrane d'ultrafiltration filtre-t-elle les molécules de manière hiérarchique ?
A: Generally speaking, if the dead-end filtration method is used, it is difficult to accurately remove small molecules among several large molecules by ultrafiltration method. This is because the membrane is a porous network structure, and its filtration mechanism is based on retention rather than passage, such as, the cut off rate of molecules larger than 100kd is >95 % si vous utilisez une membrane d'ultrafiltration de 100 kd, cependant, les molécules plus petites que la taille des pores de la membrane ne traversent pas complètement la membrane librement. Le taux de rétention moléculaire de 67kd est supérieur à 70% et la protéine de 43kd est également coupée à plus de 40%, les différents composants d'une solution mixte traversent la membrane pas aussi simple et facile qu'une solution à un seul composant, En pratique , si vous souhaitez isoler deux macromolécules, la différence de poids moléculaire entre elles doit être huit fois ou plus.
Q11. Comment séparer efficacement les grosses et les petites molécules par ultrafiltration ?
A: En raison des besoins du processus, les impuretés des macromolécules sont éliminées ou les petites molécules sont éliminées des macromolécules, c'est normal en production. Il est très nécessaire de choisir la taille des pores de la membrane, la méthode de filtration et les conditions de fonctionnement appropriées. D'une manière générale, si la spécification MWCO de la membrane est choisie entre les deux protéines, une séparation relativement idéale peut être obtenue. Si la solution protéique est relativement diluée, un fonctionnement à basse pression aidera également à obtenir de meilleurs résultats. Choisissez la filtration à flux tangentiel et effectuez plusieurs diafiltrations pour obtenir un meilleur effet de séparation.
