Méthode d’entretien et d’utilisation du tube d’ultrafiltration

Méthode d’entretien et d’utilisation du tube d’ultrafiltration

Fonction du tube d’ultrafiltration:

1) Concentration; 2) Dessalage; 3) Remplacer le tampon; 4) Il a pour effet une purification partielle.

1. Le nouveau tube d’ultrafiltration peut être utilisé directement sans autre traitement;

2. Le tube d’ultrafiltration ne peut pas être stérilisé à haute température;

3. Traitement du tube d’ultrafiltration lors du changement de protéine concentrée

Le tube d’ultrafiltration peut être réutilisé. Faites-le tremper dans 0,1 M de NaOH pendant 1 à 2 heures, lavez-le à l’eau, puis lavez-le avec une solution appropriée (eau stérilisée ou PBS) sur la centrifugeuse pendant 3 fois, ce qui peut être utilisé pour concentrer de nouvelles protéines;

4. Traitement du tube d’ultrafiltration normalement placé

Pour le tube d’ultrafiltration fréquemment utilisé, faites-le tremper dans 0,1 M de NaOH pendant 1 à 2 h, lavez-le à l’eau et trempez-le dans de l’eau stérilisée. Assurez-vous de garder la membrane filtrante humide et d’empêcher les bactéries de se développer;

5. Traitement du tube d’ultrafiltration placé pendant une longue période

Si le tube d’ultrafiltration n’est pas utilisé pendant une longue période, faites-le tremper dans 0,1 M de NaOH pendant 1 à 2 h, lavez-le à l’eau et trempez-le dans de l’éthanol à 20 % pour le stockage. Assurez-vous de garder la membrane filtrante humide et d’empêcher les bactéries de se développer;

6. Vitesse centrifuge utilisée pour le tube d’ultrafiltration

La vitesse centrifuge est généralement de 4000 tr / min (3000g est généralement recommandé, et le maximum ne peut pas dépasser 4000g). Après centrifugation pendant 5-8 minutes, l’échantillon de 4 ml peut être concentré à moins de 1 ml à des dizaines de microlitres; Si la vitesse est trop élevée, la protéine cible tombera, entraînant la perte de la protéine cible; Faible vitesse, temps et faible efficacité du travail;

7. Précautions lorsque la tête du pistolet s’étend dans le tube d’ultrafiltration

Lors de l’ajout d’une solution protéique ou d’un tampon au tube d’ultrafiltration, la tête de pistolet bleue peut être utilisée; Cependant, lorsque la protéine cible concentrée est absorbée par le fond du tube d’ultrafiltration, la tête de pistolet jaune doit être utilisée; Lorsque la tête du pistolet est insérée dans le tube d’ultrafiltration, il faut l’empêcher de toucher la membrane filtrante pour éviter de percer la membrane filtrante;

8. Réduire la perte d’adsorption protéique du tube d’ultrafiltration

La membrane du tube d’ultrafiltration peut adsorber la protéine, ce qui réduira la protéine cible d’environ 30%; Afin de réduire la perte de protéines, après avoir absorbé la solution protéique cible, purger le fond du tube d’ultrafiltration avec un tampon protéique pour laver la majeure partie de la protéine adsorbée par la membrane filtrante et réduire la perte de protéine cible; Si la protéine purifiée est concentrée, faites attention à ce que le volume concentré ne soit pas trop petit; Généralement, peu importe la façon dont la centrifugation, environ 200 μ solution de protéine L seront retenues au fond;

9. Comment définir la défaillance du tube d’ultrafiltration

Dans des conditions normales d’utilisation, lorsque la membrane filtrante n’est pas perforée, que la solution protéique concentrée ne contient pas de protéines ou que la quantité est très faible (y compris la protéine cible), tandis que la première solution filtrée contient des protéines cibles, cela indique que la membrane filtrante n’est pas valide et doit être remplacée par un nouveau tube d’ultrafiltration.