Chromatographie sur membrane à anions forts Q

 

2. Avantages du produit

2.1 Rapide et efficace - permet d'obtenir une capacité de liaison élevée à des débits jusqu'à 40 fois plus rapides que les résines traditionnelles. Par rapport à la chromatographie en lit garni-, le temps de traitement utilisant la chromatographie sur membrane est réduit de 30 à 40 fois. Le débit de fonctionnement typique est de 10 MV/min.

2.2 La chromatographie sur membrane à haute efficacité de liaison - présente une capacité de chargement élevée et des débits élevés dans des conditions de faible chute de pression, permettant de capturer des biomolécules chargées en un seul passage.

2.3 Évolutif et flexible - la série complète de produits de chromatographie sur membrane peut répondre aux divers besoins de purification des biomacromolécules, couvrant toutes les étapes depuis le développement du processus jusqu'à la production à grande échelle-. La conception structurelle de type capsule-supporte à la fois un fonctionnement à usage unique-et une réutilisation après le nettoyage.

2.4 Améliorer la productivité - La conception compacte minimise l'encombrement des installations. En éliminant les opérations de remplissage, de nettoyage, de validation du nettoyage et de stockage de la colonne, le processus nécessite moins de tampon pour l'équilibrage et peut être effectué directement sans préparation de colonne. Les coûts de main-d'œuvre peuvent être réduits jusqu'à 50 %.

 

3. Paramètre technique

3.1 Matériau structurel

	Échelle de laboratoire	petite échelle	échelle pilote	échelle de production
volume de la membrane	0,2 ml	5ml	140 ml	5L
Structure de support membranaire :	polypropylène (PP)
boîtier à membrane	polypropylène (PP)
O anneau	silicone

 

3.2 Caractéristiques de fonctionnement

	Échelle de laboratoire	petite échelle	échelle pilote	échelle de production
volume de la membrane	0,2 ml	5ml	400 ml	5L
Débit recommandé	1-6 ml/min	25-150 ml/min	2-12L/min	25-150L/min
Température de fonctionnement maximale	35 degrés
Pression de service maximale	3bar(25 degrés)
Différence de pression maximale	3bar(25 degrés)
Conditions de stockage :	Solution aqueuse à 20 % d'éthanol

 

La durée de vie de la chromatographie sur membrane Q est comparable à celle de la chromatographie sur gel d'agarose.

 

 

Figure 1. Modifications de la capacité de chargement de la chromatographie sur membrane après de multiples utilisations surveillées par BSA

De plus, nous avons évalué l’efficacité d’élimination de la chromatographie membranaire pour les protéines et les acides nucléiques des cellules hôtes. Les résultats sont les suivants.

	ADN				Professionnel de santé
	Récupération d'IgG	Teneur (pg/mg d'IgG) par RT PCR		Facteur de suppression	Contenu (ng/mg d'IgG)par Elisa		Facteur de suppression
Courir	%	Avant la membrane Q	Après la membrane Q	Enregistrer	Avant la membrane Q	Après la membrane Q	Enregistrer
1	96.7	423	1.2	2.55	7	4.8	0.16
2	97.4	438	1.3	2.53	7	4.9	0.15
3	94.7	513	1.3	2.60	6	1.9	0.50
4	95	32	0.9	1.55	6	4.2	0.15
5	96.3	45	1.1	1.61	8	5.2	0.19
6	96.5	158	0.7	2.35	8	6.2	0.11
7	96.4	267	1.9	2.15	9	7.2	0.10
8	96.8	298	2.3	2.11	9	8.2	0.04
9	97.1	746	1.5	2.70	4	2	0.30
10	96.6	39	1	1.59	4	1.5	0.43

Tableau 1. Taux d'élimination de l'ADN et des protéines des cellules hôtes dans le matériel IgG exprimé par CHO- par chromatographie sur membrane Q

 

Une série d'expériences a démontré que la chromatographie sur membrane Q peut éliminer efficacement les impuretés tout en maintenant une récupération élevée des IgG cibles.

De plus, nous avons comparé la chromatographie sur membrane Gudiling avec des marques importées, et les données de capacité de chargement sont les suivantes :

Capacité de chargement (mg/ml)	Sartorius	VOILE	Guider
BSA	29	60	45
GAZON	25	40	35
Protéine A	27	45	40
Trypsine	30	56	44

Tableau 2. Performances de chargement de différentes protéines sur notre produit et les produits concurrents

L'évaluation globale montre que notre capacité de chargement est comparable aux produits importés,

Graphique 2.À l’aide d’un module de chromatographie sur membrane Q, la BSA a été utilisée comme protéine standard pour évaluer la capacité de liaison. La capacité de liaison dynamique a été comparée à celle des produits importés. Les résultats ont montré que la majeure partie de la protéine cible pouvait être capturée et éluée avecNaCl 150 mMen utilisant la BSA comme protéine modèle.

Grâce à différentes conditions d’élution, nous avons constaté que le comportement d’élution de la chromatographie sur membrane est similaire à celui de la chromatographie sur gel d’agarose. La pureté des protéines éluées à différentes concentrations de sel varie considérablement. Dans le développement et la production réels de processus, il est nécessaire de déterminer quantitativement les conditions d’élution optimales afin d’obtenir la protéine cible avec une pureté élevée.

 

4. Cas d'application typique

Élimination de l'ADN, des virus, des protéines des cellules hôtes (HCP) et des endotoxines

Capture de plasmides, virus et protéines, ainsi que purification d'oligonucléotides

 

5. Procédure opérationnelle

5.1 : Préparation et assemblage de l'équipement :

5.1.1 : Système de chromatographie AKTA : Installez le module de chromatographie sur membrane d'une manière similaire aux colonnes à garnissage. Assurez-vous que la direction de la flèche sur le module est cohérente avec la direction du flux d'alimentation. Connectez le système à l'aide de connecteurs Luer ou de raccords Tri-Clamp.

5.1.2 Réglez le débit d'entrée sur 5 à 10 MV/min et utilisez le tampon d'équilibrage pour éliminer l'air du système. Après vous être assuré qu’il n’y a pas de bulles d’air dans le flux de sortie, connectez la sortie de perméat au système de chromatographie.

5.2 : Traitement avant-utilisation :

5.2.1:

Set the inlet flow rate to 5–10 MV/min and perform pre-treatment with 0.5 M NaOH at >5 MV pour garantir que la membrane atteigne l'équilibre.

5.2.2:

At the same flow rate, perform pre-treatment with 1 M NaCl at >5 MV pour garantir que la membrane atteigne l'équilibre.

5.3 Processus de chromatographie

5.3.1 Set the feed flow rate to 5–10 MV/min and perform pre-treatment with equilibration buffer at >5 MV jusqu'à ce que la membrane atteigne l'équilibre.

5.3.2 Une fois l'échantillon pré-filtré à travers un filtre de 0,22 μm, chargez-le sur la colonne jusqu'à ce que la totalité de l'échantillon soit appliquée ou que la capacité de liaison de la chromatographie soit atteinte.

5.3.3 Flush with equilibration buffer at >10 MV jusqu'à ce que le signal UV tombe à la ligne de base.

5.3.4 Effectuer une élution gradient ou linéaire selon le protocole conçu et recueillir les fractions selon les besoins.

5.4 Traitement post--utilisation CIP – Appareil de chromatographie sur membrane CIP

5.4.1 Set the feed flow rate to 5–10 MV/min and treat with 1 M NaOH at >10 MV jusqu'à ce que le signal UV descende en dessous de la ligne de base.

5.4.2 Après avoir fait circuler pendant 30 minutes, passer au lavage à l'eau jusqu'à ce que le pH atteigne 7 à 8, puis passer à 20 % d'éthanol et poursuivre le lavage jusqu'à ce que la conductivité se stabilise.

5.5, stockage de chromatographie sur membrane :

Après utilisation et achèvement du CIP, le module membranaire peut être démonté et stocké dans de l'éthanol à 20 %, ou conservé en ligne à température ambiante dans de l'éthanol à 20 %. La solution d'éthanol doit être périodiquement remplacée et inspectée.

 

6. Informations de commande

Filtre à capsule de chromatographie à membrane échangeuse d'anions forts Q -

	Échelle de laboratoire	petite échelle	échelle pilote	échelle de production
Modèle de produit	IEXQ0002ES	IEXQ0050ES	IEXQ0400ES	IEXQ5000ES
volume de la membrane	0,2 ml	5ml	400 ml	5L

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