Chromatographie sur membrane échangeuse d'anions faibles DEAE

Chromatographie sur membrane échangeuse d'anions faibles DEAE - Présentation du produit

 

1. Aperçu

La chromatographie par échange d'anions faibles DEAE est une technique de purification basée sur les différences dans les propriétés de charge et la densité de charge de diverses biomolécules. Étant donné que la plupart des biomacromolécules contiennent des groupes fonctionnels tels que des groupes carboxyle ou hydroxyle, leurs caractéristiques et leur ampleur de charge peuvent être ajustées en modifiant le pH de la solution tampon. Une fois que les biomolécules se sont liées à un milieu échangeur d’anions ou de cations de charge opposée, la séparation est obtenue en modifiant la force ionique ou le pH de la phase mobile. Les molécules ayant une affinité de liaison plus faible sont éluées en premier, suivies par celles ayant une affinité de liaison plus forte, réalisant ainsi une séparation efficace.

 

2. Avantages du produit

2.1 Haute efficacité : permet d'obtenir une forte liaison à des débits jusqu'à 40 fois supérieurs à la chromatographie à base de résine-. Par rapport à la chromatographie traditionnelle en lit garni-, la chromatographie sur membrane réduit la durée globale du processus d'environ 30 à 40 fois.

2.2 Efficacité de liaison élevée : La chromatographie sur membrane présente une capacité de liaison élevée et un débit élevé sous une faible chute de pression, permettant aux biomolécules chargées d'être capturées en un seul passage à travers la colonne.

2.3 Évolutif et flexible : la série complète de produits de chromatographie sur membrane peut répondre à divers besoins de purification de biomacromolécules, couvrant toutes les étapes, du développement du processus à la production à grande échelle. La conception structurelle de type capsule-supporte à la fois un fonctionnement à usage unique-et une réutilisation après le nettoyage.

2.4 Productivité améliorée : La conception compacte minimise l'encombrement des installations. En éliminant les procédures de remplissage, de nettoyage, de validation du nettoyage et de stockage de la colonne, le système peut fonctionner directement après l'équilibrage du tampon sans remplissage ni stockage de la colonne. Les coûts de main-d'œuvre peuvent être réduits jusqu'à 50 %.

 

3. Paramètres techniques

3.1 Matériaux de structure

	balance de laboratoire	petite échelle	échelle pilote	échelle de production
Volume membranaire	0,2 ml	5ml	140 ml	5L
Structure de support membranaire	Polypropylène (PP)
Boîtier membranaire	Polypropylène (PP)
O anneau	Silicone

3.2 Caractéristiques de fonctionnement

	balance de laboratoire	petite échelle	échelle pilote	Échelle de production
Volume membranaire	0,2 ml	5ml	400 ml	5L
Débit recommandé	1-6 ml/min	25-150 ml/min	2-12L/min	25-150L/min
Température de fonctionnement maximale	35 degrés
Pression de service maximale	3bar(25 degrés)
Pression différentielle maximale	3bar(25 degrés)
Conditions de stockage	Solution aqueuse à 20 % d'éthanol à 20 %

Figure 1. Modifications de la capacité de chargement de la chromatographie membranaire après plusieurs utilisations surveillées avec BSA.

De plus, nous avons évalué l’efficacité de l’élimination des protéines et des acides nucléiques des cellules hôtes par chromatographie sur membrane DEAE. Les résultats sont les suivants.

	ADN				Professionnel de santé
	Récupération d'IgG	Teneur (pg/mg d'IgG) par RT PCR		Facteur de suppression	Contenu (ng/mg d'IgG)par Elisa		Facteur de suppression
Courir	%	Avant la membrane DEAE	Après la membrane DEAE	Enregistrer	Avant la membrane DEAE	Après la membrane DEAE	Enregistrer
1	96.7	423	3.5	2.08	7.8	5	0.19
2	97.4	438	6	1.86	7.7	4.9	0.20
3	94.7	513	8	1.81	6.3	1.9	0.52
4	95	32	2	1.20	6	4.2	0.15
5	96.3	45	6	0.88	8.1	5.2	0.19
6	96.5	158	3	1.72	8.7	6.2	0.15
7	96.4	267	2	2.13	9.8	7.1	0.14
8	96.8	298	7	1.63	9.4	8.2	0.06
9	97.1	746	5	2.17	4.3	2.6	0.22
10	96.6	39	2	1.29	4.4	1.7	0.41

Tableau 1. Taux d’élimination de l’ADN et des protéines des cellules hôtes des IgG exprimées par CHO-en utilisant la chromatographie sur membrane DEAE.

Une série d'expériences a démontré que la chromatographie sur membrane Q peut éliminer efficacement les impuretés, tout en maintenant un taux de récupération élevé de l'IgG cible.

De plus, nous avons comparé la chromatographie sur membrane Gudiling avec des marques importées, et les données de capacité de chargement sont les suivantes.

Figure 2. Performances de chargement de différentes protéines sur notre chromatographie membranaire et nos produits concurrents

L'évaluation globale montre que notre capacité de chargement est comparable à celle des produits importés.

Figure 3. Performances du module de chromatographie sur membrane DEAE dans les tests de protéines de collagène

À l’aide du module de chromatographie sur membrane DEAE, les résultats de validation ont montré que la plupart des protéines de collagène cibles pouvaient être capturées et éluées à l’aide de NaCl 135 mM.

Grâce à des tests dans différentes conditions d'élution, nous avons constaté que la chromatographie sur membrane et la chromatographie sur gel d'agarose présentent un comportement d'élution similaire, la pureté des protéines variant considérablement sous différentes concentrations de sel. Dans la pratique de la R&D et de la production, il est nécessaire de déterminer quantitativement les conditions d'élution d'équilibre optimales pour obtenir des protéines cibles de haute-pureté.

 

4. Cas d'application classiques

Élimination de l'ADN, des virus, des protéines des cellules hôtes et des endotoxines

Capture de plasmides, virus, acides nucléiques et protéines, ainsi que purification d'oligonucléotides

 

5. Flux de travail opérationnel

5.1 : Préparation et assemblage des équipements

5.1.1 Le module de chromatographie sur membrane doit être installé sur le système de chromatographie AKTA d'une manière similaire aux colonnes de résine à remplissage, en garantissant que la direction du flux s'aligne avec les flèches et la direction d'entrée. Connectez-vous à l’aide de connecteurs Luer ou de raccords à pince.

5.1.2 Réglez le débit d'entrée sur 5 à 10 MV/min et utilisez un tampon d'équilibrage pour purger l'air. Continuez à rincer jusqu'à ce qu'aucune bulle ne soit observée à la sortie, puis connectez la sortie du perméat au système de chromatographie.

5.2:Traitement avant-utilisation

5.2.1 : Réglez le débit d'entrée sur 5 à 10 MV/min et effectuez un pré-traitement avec 0,5 M de NaOH pendant plus de 5 MV pour garantir que la membrane atteint l'équilibre.

5.2.2 : Sous le même débit, prétraiter davantage-avec un tampon d'équilibrage (1 × PBS) pendant plus de 5 MV pour garantir que la membrane atteint l'équilibre.

5.3 Processus de chromatographie

5.3.1

Réglez le débit d’entrée sur 5 à 10 MV/min et pré-traitez avec un tampon d’équilibrage pendant plus de 5 MV jusqu’à ce que la membrane atteigne l’équilibre.

5.3.2

Une fois l'échantillon pré-filtré à travers un filtre de 0,22 μm, chargez l'échantillon jusqu'à ce que le chargement soit terminé ou que la capacité de chargement de la chromatographie soit atteinte.

5.3.3

Laver avec un tampon d’équilibrage pendant plus de 10 MV jusqu’à ce que l’absorbance UV diminue au niveau de base.

5.3.4

Utilisez l’élution par gradient ou l’élution linéaire selon la conception du processus et collectez les échantillons en fractions selon les besoins.

5.4, ​​Traitement CIP après-utilisation – CIP de l'appareil de chromatographie sur membrane

5.4.1

Réglez le débit d'entrée sur 5 à 10 MV/min et effectuez un traitement de nettoyage-sur-place (CIP) avec 0,5 M de NaOH pendant plus de 10 MV jusqu'à ce que l'absorbance UV descende en dessous de la ligne de base.

5.4.2

Après avoir fait circuler le lavage pendant 30 minutes, passez au lavage à l'eau jusqu'à ce que le pH soit compris entre 7 et 8, puis poursuivez le nettoyage avec de l'éthanol à 20 % jusqu'à ce que la conductivité reste presque constante.

5.5, stockage par chromatographie membranaire :

Après utilisation et achèvement du CIP, le module membranaire peut être retiré et stocké par trempage dans de l'éthanol à 20 %, ou stocké en ligne à température ambiante dans une solution à 20 % d'éthanol. La solution d'éthanol à 20 % doit être inspectée et remplacée périodiquement.

 

6.Informations de commande

Filtre à capsule de chromatographie à membrane échangeuse d'anions faible de type DEAE-

	Échelle de laboratoire-	petite échelle	Échelle pilote	Échelle de production
Modèle de produit	IEXD0002ES	IEXD0050ES	IEXD0400ES	IEXD5000ES
Volume membranaire	0,2 ml	5ml	400 ml	5L

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