Un procédé efficace et peu coûteux pour la clarification et l'ultrafiltration de levures exprimant des protéines recombinantes

L'expression de gènes exogènes par la levure peut non seulement produire des protéines et des peptides recombinants, des anticorps et des vaccins, des cytokines, des facteurs de croissance, des hormones et d'autres substances bioactives, mais peut également être utilisée pour produire des enzymes industrielles, des aliments fonctionnels et des matériaux biologiques, ce qui présente de larges perspectives d'application. .

 

Le système d'expression de levure comprend deux systèmes d'expression couramment utilisés, à savoir le système d'expression de saccharomyces cerevisiae et le système d'expression de levure méthanotrophe. Le système d'expression de levure au méthanol est actuellement le système d'expression de levure le plus largement utilisé, et Pichia est le plus couramment utilisé, qui peut utiliser le méthanol comme carbone et énergie. En outre, il existe la levure Hansen, la Sphaeroides, etc.

 

Quel que soit le type de système d'expression de levure, ses processus de séparation et de purification en aval sont similaires, et le flux de processus spécifique prend comme exemple l'expression de protéines recombinantes et de médicaments polypeptidiques par la levure.

 

Les cassettes à membrane de microfiltration Guidling adoptent un canal d'écoulement ouvert et un mode de filtration à flux tangentiel, qui peuvent traiter efficacement les liquides d'alimentation complexes tels que le liquide de fermentation de levure et le liquide de craquage d'E. coli à grande vitesse, et peuvent assurer une amplification linéaire du petit test à l'échelle de production. Une conception modulaire compacte, un raccordement simple au pipeline, l'indépendance et la lisibilité du système peuvent protéger les opérateurs et prévenir la pollution biologique. Et aucune vérification d’entretien et de nettoyage. Par conséquent, il est très approprié pour l’étape de clarification du traitement en aval précoce.

 

L'objectif principal du procédé UF/DF est d'éliminer les impuretés et de déplacer les tampons. La cassette à membrane d'ultrafiltration Guidling présente une bonne homogénéité de la taille des pores de la membrane et une forte hydrophilie, ce qui peut donner à la membrane un flux plus élevé et une adsorption de protéines plus faible, ainsi qu'une conception optimisée du canal d'écoulement, avec une chute de pression plus faible, un transfert de matériau facile et un temps de filtration considérablement réduit. De plus, la série de produits est complète et flexible pour répondre aux besoins de diverses applications à différentes échelles. Par conséquent, il est très approprié pour l’étape UF/DF du traitement en aval.

 

Voici le cas d'application de la membrane Guidlingcassettedans l'expression chez la levure de protéines recombinantes.

 

Clarification par microfiltration

Nous avons utilisé une cassette de membrane poreuse de {{0}},11 mètres carrés de 0,22 μm pour clarifier 1,5 L de liquide de fermentation de levure (poids moléculaire de la protéine cible 42-55 KD) par microfiltration. Dans l'ensemble du processus de microfiltration, le taux de récupération de la protéine cible, le changement de turbidité et l'épuisement du flux membranaire ont été étudiés.

0-17min est le processus de concentration, 17-32min est le processus de lavage et de filtration. Pendant tout le processus de microfiltration, le TMP a progressivement augmenté, la vitesse d'entrée du liquide est restée inchangée et le flux de matériau moyen était de 45 LMH.

La turbidité du liquide était de 600 NTU avant microfiltration et de 8 NTU après microfiltration, et la turbidité a évidemment changé.

Les résultats ont montré que le rendement en protéine cible était > 90 %. La cassette à membrane Guidling Technology 0,22 μm est stable et adaptée à ce scénario d’application.

 

Concentration d'ultrafiltration

 

 

Les résultats ont montré que la protéine cible était complètement piégée. Les cassettes à membrane Guidling Technology 10kd peuvent fonctionner de manière stable et conviennent à ce scénario d'application.

La plupart des protéines recombinantes exprimées par la levure n'étaient pas fortement exprimées. La turbidité du liquide filtré était évidemment réduite et le taux de récupération des protéines était plus élevé. Étant donné que le temps chromatographique suivant est trop long, cela entraînera des effets néfastes sur la protéine. Afin de raccourcir le temps d'échantillonnage chromatographique, une étape de concentration par ultrafiltration peut être ajoutée et la protéine cible peut être concentrée rapidement après l'échantillon, ce qui peut atteindre l'objectif de gagner du temps, de réduire le volume de remplissage et de réduire ainsi le coût de production.

 

Les cassettes à membrane de microfiltration Guidling Technology peuvent généralement réduire la turbidité du liquide d'alimentation à moins de 20 NTU, répondant ainsi pleinement aux besoins d'ultrafiltration et de chromatographie ultérieures. Le taux de récupération par ultrafiltration des cassettes à membrane d'ultrafiltration varie en raison des différents matériaux, le taux de récupération général peut atteindre 90-95 %.

Guidling Technology vous invite à demander des kits de test pour une évaluation connexe.

 

À propos du guidisme

Guidling Technology est une entreprise nationale de haute technologie axée sur les produits biopharmaceutiques, la culture cellulaire, la purification et la concentration de fluides biomédicaux, de diagnostic et industriels. Nous avons développé avec succès des dispositifs de filtration centrifuge, des cassettes d'ultrafiltration et de microfiltration, un filtre anti-virus, un système TFF, un filtre en profondeur, des fibres creuses, etc. qui répondent pleinement aux scénarios d'application des produits biopharmaceutiques, de la culture cellulaire, etc. Nos membranes et filtres à membrane sont largement utilisés en concentration, extraction et séparation de préfiltration, microfiltration, ultrafiltration et nanofiltration. Nos nombreuses gammes de produits, depuis les petites filtrations de laboratoire à usage unique jusqu'aux systèmes de filtration de production, en passant par les tests de stérilité, la fermentation, la culture cellulaire et bien plus encore, répondent aux besoins des tests et de la production. Guidling Technology est impatient de coopérer avec vous !